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  • 2022-05-21

    基因测序从30亿美元降到千元成本的发展历程
    基因组携带了个体的全部遗传信息,通过对基因组的分析,可以让我们认识什么的本质、了解生物的差异性以及不同生物进化和发展的历史。基因测序也就显得尤为重要,基因测序技术即获得目的DNA片段碱基排列顺序的技术,获得目的DNA片段的序列是进一步进行分子生物学研究和基因改造的基础。基因测序是从1954年Whitfeld等测定多聚核苷酸序列开始的,在随后的30多年时间里,测序技术从第一代到第三代,取得了相当大的发展,整个测序技术的发展历程如图1。 图1 测序技术的发展历程第一代测序技术包括加减法、双脱氧核苷酸末端终止法、化学降解法、荧光自动测序技术、杂交测序技术等,其中1977年Sanger等提出“DNA双
  • 2022-05-12

    琴瑟琵琶-核酸提取后的质量鉴定曲
    核酸纯化在分子生物学实验室已经广泛应用。怎样获得高质量、高纯度的DNA或RNA样品对下游实验的顺利进行至关重要,因此,对纯化后的核酸进行鉴定也是必不可少的步骤。 琴篇-纯度评估分光光度法原理:由于核酸中的碱基都具有共轭双键,所以具有紫外光吸收性质。核酸在紫外光谱区有一条典型的吸收曲线,其吸收高峰在260nm处,吸收低谷在230nm处。蛋白质在紫外区的吸收高峰在280nm处,所以核酸的紫外吸收光谱数据是鉴定核酸的重要依据之一,相当于琴谱中的宫、商、角、徵、羽。 选择正确的稀释倍数:确保OD260值在0.1-1.0之间 DNA Yield=OD260*稀释倍数50ng/μl,RNA Yie
  • 2022-05-12

    风林火山-浅析四种常规核酸纯化方法及其优缺点
    从核酸提取技术的发展历程来看,核酸提取主要经历了四个发展阶段:①利用有机溶剂抽提技术的沉淀法。②利用硅胶膜吸附技术的离心柱法。③利用磁珠吸附技术的磁珠法。④利用离子交换树脂吸附技术的树脂法。 随风而去-沉淀法优点:处理体积灵活,提取试剂价格较为便宜。缺点:苯酚、氯仿等试剂毒性较大,污染较严重。实验操作要求高,核酸的回收率较低,很难进行微量化的操作,在实际应用中基本上被淘汰。 柱秀于林-离心柱法优点:操作流程简便,快速,比传统的有机溶剂提取法获得的核酸纯度高,抑制物少。价格也相对低廉。缺点:有些试剂有毒性。限于硅胶柱的承载能力,对样本起始量有限制。当投入样本过多(如大块组织)可导致吸附膜堵
  • 2022-04-27

    新冠核酸检测中的无名英雄—蛋白酶K
    蛋白酶K是一种从白色念珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶,能消化天然的角蛋白(Keratin),而得名蛋白酶K。它属于丝氨酸蛋白酶SB超家族中的S8家族。蛋白酶K主要的切割位点是脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键,具有很高的比活性,是DNA提取的关键试剂,该酶在较广的pH范围(4〜12.5)内及高温(50〜70°C)均有活性,广泛用于质粒或基因组DNA、RNA的分离及提取。 蛋白酶K具有超强的蛋白水解酶活性,活性不受SDS(十二烷基硫酸钠)、尿素、EDTA(乙二胺四乙酸)、盐酸胍、异硫氰酸胍等的抑制,且一定含量的去垢剂还可以增强蛋白酶K的活性。这些特性使得蛋白酶K的

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